药典查询 - 最新药典2000全文在线阅读

多糖的分子量与分子量分布测定法
附录Ⅴ H 多糖的分于量与分子量分布测定法
照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定。
1．对仪器的一般要求
色谱柱为测多糖专用凝胶柱(按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱)。检测器为示
差折
光检测器。
2．系统适用性试验
按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在
该分
析状态下的分配系数(K<[d]>)应达到规定的要求。
t<[R]>-t<[O]>
K<[d]>＝————————
t<[T]>-t<[O]>
式中 t<[R]>为供试品峰的保留时间；
t<[O]>为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间；
t<[T]>为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。
3．测定法
(1)系统校正 根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品(常用的为葡聚糖)
分别
用流动相制成每1ml中约含10mg的标准溶液，分别取上述标准溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱
图。由
GPC专用软件绘制标准曲线，得线性回归方程：
lgM<[w]>=a+bt<[R]>
式中 M<[w]>为标样的已知重均分子量；
t<[R]>为标样的保留时间。
(2)样品测量 取供试品溶液25μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算分子量：
Mn＝∑RI<[i]>／∑(RIi／M<[i]>)
Mw＝∑(RI<[i]>M<[i]>)／∑RI<[i]>
D＝M<[w]>／M<[n]>
式中 M<[n]>为数均分子量；
RI<[i]>为样品i级分的物质量，即供试品在保留时间i的峰高；
M<[i]>为样品i级分的分子量，即供试品在保留时间i的分子量。
4．结果处理
采用GPC专用软件，可获得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各时间点的分子量
(片段数
据)和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。