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紫外分光光度法
附录Ⅴ A．紫外分光光度法
1.仪器的校正和检定 由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变
动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常
用汞灯中的较强谱线237.83nm、 253.65nm、 275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、
365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与
656.10nm谱线进行校正,钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、
460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰,也可作波长校正用,但因来
源不同会有微小的差别，使用时应注意。
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波 长 /nm │ 235(最小)│ 257(最大)│ 313(最小)│ 350(最大)
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吸收系数E1％ 1cm │ 124.5 │ 144.0 │ 48.62 │ 106.6
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吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬
酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处
测定并计算其吸收系数， 并与规定的吸收系数比较，如上表，相对偏差应在±1％以内。
杂散光的检查可按下表的试剂和浓度，配制成水溶液,置1cm石英吸收池中，在规定
的波长处测定透光率，应符合表中的规定。
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试 剂 │ 浓度％ (g/ml)│ 测定用波长(nm) │ 透光率 (％)
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碘 化 钠 │ 1.00 │ 220 │ <0.8
亚 硝 酸 钠 │ 5.00 │ 340 │ <0.8
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2.对溶剂的要求 测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是
否符合要求，即用1cm石英吸收池盛溶剂,以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）
测定其吸收度。溶剂和吸收池的吸收度,在220～240nm范围内不得超过0.40，在241～250
nm范围内不得超过0.20，在251～300nm范围内不得超过0.10， 在300nm以上时不得超过
0.05。
3.测定法 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，
采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供
试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波
长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度,并以吸收度最大
的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。
仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低；狭缝宽
度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，由于吸收池和溶剂本身
可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。
用作鉴别和检查项目的方法，分别按各品种项下的方法进行。鉴别项下吸收度读数
的范围可根据制剂的实际含量和供试液的稀释倍数估算。
用于含量测定的方法一般有以下几种。
(1) 对照品比较法 按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对
照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100%±10％,所用溶剂
也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后，按下式计算供
试品中被测溶液的浓度：
C<[x]>＝(A<[x]>／A<[R]>)C<[R]>
式中 C<[x]>为供试品溶液的浓度；
A<[x]>为供试品溶液的吸收度；
C<[R]>为对照品溶液的浓度；
A<[R]>为对照品溶液的吸收度。
(2) 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸
收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校
正和检定。
(3) 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各
品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波
长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。
若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。